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活性氧检测试剂盒
活性氧检测试剂盒
Reactive Oxygen Species Assay Kit
规格:100次~500次
价格:¥325.00
保存条件:-20°C干燥避光保存
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中文名称 活性氧检测试剂盒
英文名称 Reactive Oxygen Species Assay Kit
Cat # 044-100次~500次 
规格 100次~500次  价格 ¥325.00 
贮存条件 -20°C干燥避光保存 
保质期 12个月  状态 现货 

  活性氧检测试剂盒

  产品组成:

  产品简介:

      活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA 进行活性氧检

  测的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解

  生成DCFH。而DCFH 不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无

  荧光的DCFH 生成有荧光的DCF。检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

      本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup,以便于活性氧的检测。Rosup 是一种混合物,浓度为

  50mg/mL。

      本试剂盒本底低,灵敏度高,线性范围宽,使用方便。

      本试剂盒可以测定100~500 个样品。

  使用说明:

  1. 装载探针

      对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的

  药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照或自己感兴趣

  的药物刺激细胞,后装载探针。

      原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,使终浓

  度为10μmol/L。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,

  通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1mL。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细

  胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20~30

  分钟后可以显著提高活性氧水平。

      收集细胞后装载探针:按照1∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10μmol/L。细胞收集

  后悬浮于稀释好的DCFH-DA中,细胞浓度为一百万至二千万/mL,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3~

  5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细

  胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,或把细胞等分成若干份后刺激

  细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20~30分钟后可以显著提高活性氧水平。

  说明:仅在阳性对照孔中加入Rosup作为阳性对照,其余孔不必加入Rosup。

  2. 检测

      对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光

  酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细

  胞仪检测,也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。

  3. 参数设置

      使用488nm激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱

  和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。

  4. 其它说明

      阳性对照可以按照1∶1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1mL,可以加入1μL的阳性对照刺激。

  通常刺激后20~30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效

  果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照的浓

  度。如果活性氧升高得过快,可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。

      另外,对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1∶2000~1∶5000

  稀释DCFH-DA,使装载探针时DCFH-DA的浓度为2~5μmol/L。探针装载的时间也可以根据情况在15~60

  分钟内适当进行调整。

      活性氧阳性对照(Rosup)仅仅用于作为阳性对照的样品,并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性

  对照。

  保存条件:

  -20℃避光保存,有效期一年。

  注意事项:

  1. 探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。

  2. 探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情

  况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考上图。

  3. 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。

  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

活性氧检测试剂盒
活性氧检测试剂盒
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