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CCK试剂盒
CCK试剂盒
Cell Counting Kit
规格:500 次
价格:¥575.00
保存条件:4°C干燥避光保存
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中文名称 CCK试剂盒
英文名称 Cell Counting Kit
Cat # 025-500次 
规格 500 次  价格 ¥575.00 
贮存条件 4°C干燥避光保存 
保质期 12个月  状态 现货 

  Cell Counting Kit(CCK 试剂盒)

  

      产品简介:

  Cell Counting Kit 简称CCK 试剂盒,为MTT 法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学

  名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞

  毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

  CCK 法与其它检测方法之间的比较:

  

      CCK 用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

  操作说明:

  一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

  1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

  2、按比例(例如:1/2 比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5 个细胞浓度梯度,

  每组3-6 个复孔。

  3、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁,然后加CCK 试剂培养一定时间后测定OD 值,制作出一条以细胞数

  量为横坐标(X 轴),OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数

  量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。)

  二、细胞活性检测

  1、在96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2 的条件下)。

  2、向每孔加入10 μL 的CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。

  3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

  4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

  5、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS

  溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

  三、细胞增值-毒性检测

  1、在96 孔板中配置100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时(在37℃,5% CO2 的条件下)。

  2、向培养板加入10μL 不同浓度的待测物质。

  3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。

  4、想每孔加入10μL CCK 溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。

  5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

  6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

  7、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS

  溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

  注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养

  基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培

  养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

  备注:

  ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。

  ②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培

  养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。

  ③白细胞可能需要培养较长时间。

  ④当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵

  敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,

  请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。

  ⑤如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵

  敏度最高。

  ⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影

  响。

  活力计算:

  细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0 加药)-A(空白)] ×100

  A(加药):具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度

  A(空白):具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度

  A(0 加药):具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

  *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

  保存条件:

  4℃避光保存,有效期一年。

CCK试剂盒
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