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Super ECL Plus超敏发光液
Super ECL Plus超敏发光液
Super ECL Plus Detection Reagent
规格:100 mL
价格:¥435.00
保存条件:4°C干燥避光保存
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中文名称 Super ECL Plus超敏发光液
英文名称 Super ECL Plus Detection Reagent
Cat # 045-100 mL 
规格 100 mL  价格 ¥435.00 
贮存条件 4°C干燥避光保存 
保质期 12个月  状态 现货 

 SuperECL Plus超敏发光液

  1. 产品描述:SuperECL Plus超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,SuperECL Plus超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂:

  (1) 具有极高灵敏度和高信噪比,可检测10~100 fg抗原;

  (2) 可在日光灯下进行发光操作;

  (3) 发光迅速,荧光可使X光胶片感光达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;

  (4) 可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000),极其节省抗体。

  2. 用途:用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。

  3. 使用方法:

  (1)执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

  (2)Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液A和B,放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

  (3)用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。

  (4)用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。

  (5)打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。

  (6)暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。

  4. 储存: oC密封避光保存一年以上。短期可放置室温。

  5. 安全性:无特殊毒性,按普通化学品处理。

  6. 注意事项:

  (1)步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

  (2)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

  (3)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

  (4)由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。

  (5)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

  (6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

  (7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

Super ECL Plus超敏发光液
Super ECL Plus超敏发光液
Super ECL Plus超敏发光液