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2× SYBR Green qPCR 试剂盒
2× SYBR Green qPCR 试剂盒
2× SYBR Green qPCR Mix
规格:200次x 50μL反应体系
价格:¥1050.00
保存条件:-20°C干燥避光保存
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中文名称 2× SYBR Green qPCR 试剂盒
英文名称 2× SYBR Green qPCR Mix
Cat # 021-200次x 50μL反应体系 
规格 200次x 50μL反应体系  价格 ¥1,050.00 
Ex (nm) 497  Em (nm) 525 
贮存条件 -20°C干燥避光保存 
保质期 6个月  状态 现货 

  2× SYBR Green qPCR Mix

  包装量:

  

  产品组成、储存、浓度:

  储存:-20 ℃ 避光保存6个月,使用前充分溶解混匀。短期使用可放在4 ℃,避免反复冻融。

  制品说明:

  本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR Green I等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用2×Premix Type试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。

  本品采用全新的Hotmaster Taq DNA 聚合酶,该酶不同于一般Hot-start 酶之处在于,一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。

  注意事项:

  1. 本制品不含参比染料ROX,客户可根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

  2. 本制品含SYBR Green I 强光下易分解,降低灵敏度,使用时避免长时间强光照射本制品。

  3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。

  4. 本制品含有4 mM MgCl2(反应体系终浓度是2 mM Mg2+),可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。

  建议PCR条件(以50 μL 反应体系为例,反应液配制请在冰上进行)

   

  PCR 循环(三步法)

  

     荧光定量PCR实验常见问题和解决方案

  A1: 无信号值出现

  Q1:

  1. 反应循环数不够。一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个循环会增加过多的背景信号。

  2. 检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。

  3. 引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。

  4. 引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。

  5. 模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

  6. 模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

  A2: CT值出现过晚

  Q2:

  1. 扩增效率低,反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。

  2. PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。

  3. PCR产物太长。一般采用80-150bp的产物长度。

  A3: 标准曲线的线性关系不佳

  Q3:

  1. 加样存在误差,使得标准品不呈梯度。

  2. 标准品出现降解。应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。

  3. 引物或探针不佳。重新设计更好的引物和探针。

  4. 模板中存在抑制物,或模板浓度过高。

  典型扩增曲线和融链曲线图

 

2× SYBR Green qPCR 试剂盒
2× SYBR Green qPCR 试剂盒
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